エコサンテ物産・筑波大学との共同研究　フローサイトメトリーを用いたアポトーシス誘導作用試験

今回用いたMultiCaspaseは、2種類の試薬でＥＳＤ処理した細胞を染色し、その染まり具合をフローサイトメトリーにより測定し、細胞がアポトーシスのどの期に存在するかを測定することができる。

 

試薬の1つである、SR-VAD-FMKは細胞浸透性の試薬で、アポトーシスにより活性化するMultiple caspaseと共有結合する。

 

その結果得られるシグナルは、細胞に存在する活性化カスパーゼの量と比例するので、SR-VAD-FMKにより染まる細胞は、アポトーシスの前期～中期に存在するとみなすことができる。

 

もうひとつは、膜構造の完全性指示薬　7-AADである。膜が完全である、生細胞や健康な細胞、アポトーシス前期～中期の細胞には染まらないが、死細胞、アポトーシス後期の細胞は染まる。

 

この2試薬の染まり具合により、上表のように細胞を分類することができる。